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使用基因工程手段，将目的基因运用PCR技术将其P出之后 ，然后构建一个能在原核或真核细胞中大量表达的载体上 ，构建成功后，大量克隆然后转到表达菌中进行大量表达 ，最后选择合适的方法进行纯化目的蛋白 。
转如何设计用于蛋白表达的引物设计自我总结
当拿到一个基因的DNA片段后 ，就需要把它导入一个载体，一方面长期保存 。另一方面也需要以载体为媒介将基因导入受体细胞中。基因表达载体的构建是基因工程的核心 。
常用的载体有细菌质粒，噬菌体和动植物病毒 。其中质粒载体最常用。所谓载就是一个很长的环状DNA ，携带一些基因 ，可以导入细菌中自我复制，也可以从细菌中提取出来改造 。
现在我们就需要把SUN片段连到一个载体 ，用VectorNTI打开 ，研究一下用哪个酶处理，这个载体需要用Sma1这个酶切开 ，然后用SUN连上 ，替换切下来的ccdb，这里要用到两个酶 ，一个Sma1限制性内切酶切开 ，一个DNA连接酶把新片段连上，植物转基因载体和这些酶都是非常常用的试剂 。
载体构建好之后需要把它们导入大肠杆菌中复制 ，这里就要用到大肠杆菌的感受态了 ，十把构建好的载体和感受态混合，然后放到42度热水处理个1分钟，再冰上放个3分钟。
这时需要一些培养细菌的培养基来培养菌们 ，大肠杆菌这种菌很好养活 ，唯一需要注意的是，灭菌过后的培养基要小心保存。把在冰上处理过的大肠杆菌放到培养基中培养一天 ，为了防止没有转入载体的菌也混进来 ，我们在载体上加入了一个抵抗抗生素的基因 。
这样我们在培养基中加入这种抗生素，在里面就只有需要的大肠杆菌能生长了 。最后得到了上亿个携带着含有我们的SUN基因的载体的大肠杆菌 ，这时就需要把质粒再提出来。
实验室里提质粒需要用专门的试剂盒 ，也可以简化一下，先把菌液离心让菌沉淀 ，然后再用水把菌打散 ，然后煮沸1分钟再离心，取上清 ，上清中加乙醇让DNA析出 ，再离心让DNA沉淀，最后用水把DNA溶解 。这样提出来的DNA会有很多杂质以及细菌的基因组DNA 。
扩展资料：
目的基因与运载体结合：
将目的基因与运载体结合的过程，实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体 ，
要用一定的限制酶切割质粒 ，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端 。然后用同一种限制酶切断目的基因 ，使其产生相同的黏性末端（部分限制性内切酶可切割出平末端 ，拥有相同效果） 。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处。
首先碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起 ，碱基之间形成氢键 ，再加入适量DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键 ，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来 。
形成一个重组DNA分子 。如人的胰岛素基因就是通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合 ，形成重组DNA分子（也叫重组质粒）的。
百度百科-基因表达载体
基因工程的基本操作程序
初涉基因工程领域，对基因操作一窍不通 ，连PCR都没做过 ，只知道有一个蛋白，已知它的序列，要在体外把它表达出来 ，这就是我的任务 。首先是引物设计 ，众所周知的三大引物设计软件，oligo 、primer 、lasergene（DNAstar） ，到底用哪一个呢？这里简单说一下这三大设计软件的特点：Oligo：对引物的分析功能十分强大 ，包括引物发卡结构，引物二聚体 ，Tm值和非特异性结合等等都能进行全面的的分析 ，并能生成详细的报告 。毫无疑问，oligo的分析功能是最强大的 ，可惜的是它的自动搜索能力是三者中最弱的。Primer premier：具有强大的搜索功能 ，能按照不同的要求设计引物，并给引物打分 ，但是它对引物的分析功能远比不上oligo强大和全面。非常适合初学者 。Lasegene：结合上述两者的优点 ，但搜索和分析功能都属于中规中矩 。笔者在使用过程中发现一个严重的缺点，lasegene不能对引物进行编辑和修改，在这一点上Primer premier就做得好多了。软件各有所长 ，使用哪个软件完全取决于自己的习惯和爱好 。但不论使用哪个引物设计软件 ，笔者认为，理解引物设计的基本原理是必要的 。调阅读框不是调你目的基因的ATG ，而是调你目的基因正确翻译的第一个密码子和表达载体的N端Tag的起始密码子ATG之间的碱基数要保持在3n。设计用于表达的引物 ，主要流程基本如下：1、选切点：按照MCS中的切点来选?2 、调阅读框：主要是调N端和C端两个方向，由于一般载体都有N端的Tag ，整个载体的翻译是从N端Tag的起始密码子ATG开始（ATG并不等于起始密码子,一定要注意只有RBS后第一个ATG才是起始密码子） ，你可以模拟你的片段已经通过酶切连到载体上，然后计算N端Tag的起始密码子到你的目的基因的第一个密码子（这里不一定是ATG ，很多情况是部分表达或截断表达 ，这里顺带解决部分人的疑问，部分表达不用特别在目的片段前加一个ATG）之间的碱基数为3n ，若为3n+1 ，你要在forward primer的5?端，但要在酶切位点后随机加2个碱基，若3n+2 ，则加一个 ，捎带注意一下，加上去以后不要形成TAA 、TAG和TGA 。
基因工程的基本操作程序的内容如下：
基因工程的基本操作程序指的是生物基因工程技术中的一种操作的程序 。
1、目标获取
从基因文库中获取：
（1）基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段 ，导入受体菌的群体储存 ，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。
（2）基因文库的种类：1 、基因组文库；2 、部分基因文库 。
利用PCR技术扩增目的基因：
（1）PCR含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核糖合成技术 。全称是多聚酶链式反应。
（2）PCR原理：DNA双链复制 。
（3）前提条件：有一段已知目的基因的核苷酸序列 ，以便根据这一序列合成引物 。
（4）扩增过程：目的基因DNA受热变性后解链为单链 ，引物与单链相应互补序列结合，在DNA聚合酶的作用下进行延伸 ，如此重复循环多次。
（5）结果：每次循环后的目的基因的量增加一倍 ，即成指数形式扩增。
人工合成：
如果基因较小，核苷酸序列又已知 ，可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成 。
2、载体构建
组成：目的基因、启动子 、终止子 、标记基因 。
功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在 ，并且可以遗传给下一代；2、使目的基因能够表达和发挥作用。
步骤：
⑴用一定的限制酶切割质粒，使之出现一个黏性末端切口 。
⑵用同种限制酶切割目的基因，产生相同的黏性末端 。
⑶将目的基因片段插入质粒切口 ，加入适量DNA连接酶 ，使目的基因与质粒形成重组质粒。
⑷基因表达载体的构成：目的基因+启动子+终止子+标记基因 。
关于基因工程：
基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础 ，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段 ，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子 ，然后导入活细胞 ，以改变生物原有的遗传特性 、获得新品种 、生产新产品的遗传技 。
基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。它是生物工程的一个重要分支，它和细胞工程、酶工程 、蛋白质工程和微生物工程共同组成了生物工程 。所谓基因工程是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术 。
基因工程最突出的优点是打破了常规育种难以突破的物种之间的界限 ，可以使原核生物与真核生物之间 、动物与植物之间 ，甚至人与其他生物之间的遗传信息进行重组和转移。人的基因可以转移到大肠杆菌中表达，细菌的基因可以转移到植物中表达 。
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